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TECHNICAL COLUMN

常見問題
常見問題

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  • Synaptic Systems常見問題&FAQs

    Synaptic Systems(SySy)品牌成立于德國,專注于研發和生產針對突觸和神經科學相關抗體,以及用于細胞生物學、組織病理學和高分辨率顯微鏡的各種抗體,除此之外,還推出與SySy抗體配套使用的試劑盒、試劑等產品組合,全方面滿足客戶的各種需求??贵w產品線主要有:突觸活性區域相關抗體、突觸后蛋白相關抗體、RNA修飾如m6A抗體、突觸粘附蛋白抗體、SNARE相關抗體、Alzheimer's相關抗體、細胞骨架、離子通道相關抗體等。

     

    那么接下來為各位同學整理出常見問題,希望這能幫到您。(重組以及儲存)

     

    1. 應該如何重組抗體?

    我們所有純化的抗體都是從PBS中凍干的。

    所以這也就解釋了為什么好多同學疑問:我加了水以后到底是PBS溶液,還是正常溶液。

    ①為了在PBS中重組抗體,加入說明書中給出的去離子水的量。

    所有的抗體都是在PBS中凍干,加了水,也就變成了PBS溶液,加水復溶到對應濃度即可,然后分裝保存避免反復凍融~

    如果需要更大的體積,按上述方法加水,然后加入所需量的PBS和穩定載體蛋白(如BSA)至最終濃度為2%。

    注:由于一些抗體已經含有白蛋白。在添加更多的載體蛋白時要考慮到這一點。


    ②如果需要,添加少量疊氮化物或硫柳汞,以防止微生物生長。如果你想保持4°C的溫度儲存,特別建議這樣做!

    ③重組熒光標記抗體后,加入1:1 (v/v)的甘油至終濃度為50%。這降低了你的抗體的凝固點,使你的抗體在-20°C時保持液態。

    注:甘油也可以添加到未標記的一抗中。這是一種避免凍融循環的合適方法。


    2. 我應該如何儲存抗體?

    收到抗體時:

    我們所有的抗體和對照蛋白/肽都是凍干(真空冷凍干燥)粉末運輸的,在環境溫度下保持穩定,幾周內不會損失質量。

    ①未標記和生物素標記的抗體和對照蛋白在重組前應保存在4°C。當它們還在凍干狀態時,千萬不要儲存在冰箱里! 溫度低于0°C可能會導致性能下降。

    ②收到熒光標記抗體后應立即重組。長期儲存(幾個月)可能導致聚集。

    ③對照肽重組前,應保存在-20°C。


    重組后的長期儲存(一般考慮)

    ①儲存冷凍室不能是無霜(“無霜冷凍室”):這種凍結和解凍之間的循環(以減少結霜),正是應該避免的。出于同樣的原因,抗體小瓶應放在冷凍室溫度波動最小的區域,例如靠后而不是放在門架上。

    ②將抗體等分,并冷凍保存(-20°C至-80°C):避免非常小的等分(低于20ul),并使用盡可能小的儲存瓶或管。等分越小,抗體在儲存瓶或管表面的蒸發和吸附對儲存液濃度的影響越大。

    注:抗體在表面的吸附會導致活性的大量喪失。

    ③將甘油添加到最終濃度為50%時,并將抗體保持在-20°C的液態。這有效地避免了凍結和解凍循環。

     

    產品存儲的具體提示

    Control proteins / peptides

    儲存于-20°C~ -80°C

     

    Monoclonal Antibodies

    Ascites和hybridoma supernatant應保存在-20°C ~ -80°C。

    不建議在4°C下長時間儲存! 與血清不同,腹水可能含有蛋白酶,可降解抗體。
    Purified IgG應保存在-20°C~ -80°C。添加像BSA這樣的載體蛋白會增加長期穩定性。我們的許多抗體已經含有載體蛋白。詳細資料請參閱數據表。

     

    Polyclonal Antibodies

    Crude antisera:添加抗微生物藥物后,可在4℃保存。 然而,最佳儲存(-20°C ~ -80°C)。


    Affinity purified antibodies

    不如抗血清穩定。建議在-20°C ~ -80°C下保存。添加像BSA這樣的載體蛋白會增加長期穩定性。我們的大多數抗體已經含有載體蛋白。詳細資料請參閱數據表。

     

    Fluorescence-labeled Antibodies

    用1:1 (v/v)甘油,在-20°C下保存。保護這些抗體免受光照。

     

    重點:避免所有抗體重復凍融循環!



  • 探針法,檢測損傷膠原蛋白的FAQ

    概述

    3Helix由約翰霍普金斯大學(Johns Hopkins University)的2位博士Yang Li & Michael Yu成立,是一家專業研發、生產、銷售膠原蛋白雜交肽(collagen hybridizing peptides)的高科技公司。為科學家和臨床醫生提供新的工具來研究膠原蛋白病理,并開發具有高膠原蛋白重塑活性的疾病的診斷和治療方法。

    http://www.egg-cloud.cn/brand/3Helix.shtml

     

    在科研和醫學診斷領域,準確檢測損傷膠原蛋白對于理解組織修復、疾病進展和治療響應至關重要。艾美捷科技在此分享關于新型多肽探針CHP檢測損傷膠原蛋白的原理、優勢及使用過程中可能遇到的常見問題。


    CHP探針的適用性

    Q1: CHP探針能否用于冰凍切片和石蠟切片染色?能否區分不同類型膠原蛋白?

    A1: CHP探針適用于冰凍切片和石蠟切片的染色。它主要檢測受損的膠原蛋白分子,而不區分膠原蛋白的具體類型。


    CHP產品的穩定性

    Q2: CHP產品在4°C溶液中的穩定性如何?溶解后能否在-20°C或-80°C下分裝保存?

    A2: CHP產品在4°C溶液中非常穩定,可保存一年而純度幾乎不下降。所有CHP產品均可在-20°C或-80°C下分裝保存,但無需分裝,因為肽在多次凍融循環后仍保持穩定。


    CHP探針的使用

    Q3: 是否每次使用CHP探針前都需要加熱?

    A3: 是的,每次使用前都需要加熱CHP探針。加熱后的CHP探針在化學和物理上都非常穩定,但不建議加熱儲備溶液,以免多次熱冷循環。


    染色操作的注意事項

    Q4: 如果在組織切片染色時操作時間超過3分鐘,會有影響嗎?

    A4: 操作時間超過3分鐘不會影響實驗結果。但建議盡量縮短CHP冷卻時間以及加入CHP試劑的操作時間,以獲得極高的結合率。


    染色條件的選擇

    Q5: 為什么建議在4°C下進行CHP探針染色孵育?

    A5: 在4°C下進行孵育可以增強CHP對變性膠原蛋白的親和力,并且適用于冷凍組織切片的染色。


    固定劑和染色時間的選擇

    Q6: 建議使用哪種固定劑或固定技術?染色結果是否取決于固定?

    A6: 固定步驟不會決定染色結果。CHP染色不需要固定。如果需要固定,建議使用甲醛而非多聚甲醛或戊二醛。


    共染色和抗原修復的影響

    Q7: 如何在載玻片上進行CHP與抗體共染色?抗原修復是否會影響CHP染色?

    A7: CHP與抗體共染色操作簡單,可直接混合后進行孵育??乖迯吞幚頃鰪奀HP染色,但建議在未經AR處理的組織上進行CHP染色以檢測自然降解或變性的膠原。


    信號增強和對照選擇

    Q8: 使用生物素標記的CHP(B-CHP)是否可以增強信號?

    A8: B-CHP可以通過熒光標記的鏈霉親和素檢測增強信號。對于陰性對照,建議使用未經預熱的CHP溶液。


    背景熒光的解釋

    Q9: 為什么在正常組織中會檢測到一些熒光?

    A9: 在正常組織中檢測到背景熒光可能是由于CHP與天然組織中低含量降解膠原結合或組織的自發熒光。


    推薦產品

    艾美捷科技推薦以下產品用于膠原蛋白檢測:

    · CHP探針

    · 熒光標記的鏈霉親和素

    · 甲醛固定劑


    參考文獻

    1. In situ imaging of tissue remodeling with collagen hybridizing peptides. ACS Nano, 2017, 11, 9825-9835.

    2. Visualizing collagen proteolysis by peptide hybridization: From 3D cell culture to in vivo imaging. Biomaterials, 2018, 183, 67-76.


    艾美捷科技致力于提供高質量的科研產品和解決方案,助力科研和醫學診斷的發展。如有任何疑問或需求,請隨時聯系我們。


  • Cayman化合物產品使用指南

  • BioXCell-常見問題匯總

           1.收到BioXCell產品后應如何處理?

    收到抗體后,在分裝儲存及使用時需在生物安全柜中進行,并使用無菌槍頭、離心管、注射器和緩沖液等,降低污染率。另外,使用前抗體要處于低溫狀態。 


    2.如何正確保存BioXCell抗體產品?

    請將抗體置于4℃避光儲存。無菌操作。即使分裝后,也不推薦將抗體冷凍保存。避免將抗體稀釋至工作濃度后在4℃條件下儲存超過一天,建議現用現配。  


    3.萬一沒注意說明書上的儲存要求,將抗體置于室溫儲存了一段時間,是否還可以繼續使用?

    一般來說,室溫下放置幾個小時不會影響抗體的活性,但是放置幾天或者更長時間則有可能會導致蛋白降解,影響抗體活性,不建議使用。  


    4.BioXCell抗體的保質期有多久?

    按說明書要求儲存,BioXCell抗體有效期為1年。  


    5.BioXCell抗體是凍干粉還是液體形式?

    BioXCell抗體均以無菌PBS緩沖液的形式提供。該溶液中不含穩定劑、防腐劑、載體蛋白、甘油或任何其他添加劑??贵w的pI值決定了PBS緩沖液的pH值。  


    6.抗體收到后有漂浮物、絮狀沉淀或聚集物是否正常?應如何處理?

    存在聚集物或沉淀物屬于正?,F象,不會影響抗體的活性??梢栽谑覝叵螺p輕搖晃使其溶解,或過濾或離心去除。  


    7.Bioxcell抗體的濃度是多少?BioXCell不同批次抗體的濃度不同,但一般來說是在4到11mg/mL之間。包裝的離心管上會標記抗體的具體濃度。如果需要在訂購之前知道產品的確切濃度,請聯系艾美捷科技。  


    8.應如何稀釋抗體至工作濃度?

    建議使用官網推薦的InVivoPure系列專用稀釋緩沖液來稀釋BioXCell抗體,艾美捷在每個產品頁面上都列出了每種抗體的推薦InVivo Pure 稀釋緩沖液。在沒有InVivoPure稀釋緩沖液的情況下,可以使用與抗體PBS緩沖液pH相同或相近的的無菌PBS,以避免蛋白聚集。稀釋時,建議使用預冷緩沖液,并在生物安全柜中操作,使用無菌槍頭、試管、注射器和緩沖液來保持抗體的無菌性。應避免將抗體稀釋至工作濃度后在4℃條件下儲存超過一天。 


    9.BioXCell抗體的氨基酸或DNA序列是什么?

    我們的抗體是使用標準雜交瘤技術生產的,因此抗體的AA或DNA序列通常是未知的。  


    10.BioXCell抗體的抗原表位是什么?

    BioXCell不提供抗原表位信息,請客戶自行參考文獻。  


    11.BioXCell抗體在體內的半衰期是多久?

    廠家內部并沒有抗體在體內的半衰期數據。因為抗體的半衰期是高度可變的,并且受到物種、同型、抗原分布、抗原濃度和許多其他因素的影響。建議閱讀感興趣抗體已發表的相關文獻,參考與您實驗條件及設計相近的實驗數據,預估抗體的半衰期。 


    12.BioXCell抗體是否適用于體內注射實驗?

    BioXCell所有的產品都是專門為體內使用而配制的。所有抗體均在無菌 InVivoPure緩沖液中配制??贵w溶液不含穩定劑、防腐劑、載體蛋白、甘油或任何其他添加劑。內毒素水平 <2EU/mg ( InVivoMab),這使它們有資格進行大多數體內研究。為了滿足最嚴格的要求,BioXCell還提供內毒素水平較低的抗體:<1EU/mg ( InVivoPlus)。  


    13.BioXCell抗體是否適合體外應用?

    可用于體外應用,例如細胞培養實驗和診斷測定,包括蛋白質印跡、免疫沉淀、IHC、流式細胞術等。請參閱各個產品頁面以獲取已批準的列表每種抗體的應用。另外所有BioXCell抗體都是未偶聯的,因此流式細胞術和免疫熒光等應用需要使用熒光染料偶聯的二抗。  


    14.小老鼠體內注射實驗,應該多久注射一次?每次注射多少抗體??

    任何給定實驗和抗體的最佳給藥劑量和頻率可能會因實驗系統(即小鼠品系、疾病模型等)、實驗持續時間、靶組織、抗原濃度和許多其他因素而有很大差異細節。出于這個原因,最佳劑量最好通過閱讀與您感興趣的抗體相關的產品參考文獻來確定,以查找與您的實驗系統類似的實驗系統中的已發布數據。以此現有研究為起點,您可以通過實驗優化給藥劑量和頻率。BioXCell的每種產品在產品網頁上都有最新的參考列表。  


    15.體內實驗中同種型對照組是否重要?如何選擇合適的同種型對照?

    考慮同型對照處理組需要生成可靠的數據,因為它允許研究人員準確地區分以抗原特異性方式從初級抗體結合觀察到的結果和從非抗原特異性結合或抗體注射的其他非特異性作用觀察到的結果。同型對照抗體必須與一抗的宿主物種、同種型和亞類相匹配。為了方便我們的客戶,我們在每個產品頁面上列出了每種抗體的推薦的同型對照貨號。  


    16.如果覺得自己的抗體效果不佳,怎么辦?

    如果您懷疑您的抗體沒有發揮最佳功能,請務必認真填寫并提交技術服務申請表。您填寫的實驗信息越充分,BioXCell技術團隊的建議才更可靠。  


    17.如何申請和查詢產品COA?

    官網自助鏈接:https://apps.bioxcell.com/certificate-of-analysis 


    18.應該如何購買BioXCell抗體?

    艾美捷科技是BioXCell中國區代理,歡迎咨詢購買:400-6800-868  


    19.Bioxcell InVivoMab和InVivoPlus兩種級別的抗體有什么區別?


    InVivoMAbInVivoPlus
    純度>95%>95%
    蛋白質完整性(通過SDS PAGE驗證)
    內毒素含量<2EU/mg<1EU/mg
    WB, FC or ELISA驗證

    蛋白質聚集體≤5%
    鼠病原體檢測
    不含疊氮化物和載體蛋白
    大量現貨供應
    體內研究
    貨號開頭BE開頭BP開頭
    歸納滿足基礎科研臨床前研發/升級款


  • 關于產品運輸和保存條件的說明


    尊敬的客戶:

    感謝您選用艾美捷科技代理品牌的產品,您的信任和支持是我們的動力! 

    您可能注意到了部分產品的運輸條件和保存條件不一致,也許這會讓您擔心產品的質量。我們非常 理解您的顧慮,對此我們特別說明如下: 


    運輸條件是根據在短期運輸過程中不影響產品質量的原則,經由對應品牌廠家測試后制定的,可能 有別于推薦的長期儲存條件(為了更長的保存時間)。某些產品在短期內(如運輸時)不按長期保存條 件保存并不會影響到其質量。而那些在短期內對溫度條件敏感的產品則將加藍冰(冰袋)或干冰運輸, 以防止溫度驟變給產品穩定性造成影響。 


    客戶在收到產品包裹的時候,冰袋會出現融化的正?,F象,它主要在整個運輸過程中起到延緩溫度 驟變的作用,廠家生產試劑時會有穩定性處理,不會影響效能。 


    絕大部分試劑在實驗開始前,需要將試劑恢復到室溫。如果您收到貨時溫度為常溫,不用擔心,這 些都在廠家產品開發時的考慮范疇內。如果當日即用,就不用再解凍可以盡快實驗,如當下不用,就盡 快按照產品長期儲存溫度保存即可,如果后續是多次使用則建議先分裝后再保存,避免多次反復凍融。 如使用中遇到問題可以及時聯系艾美捷科技。 


    艾美捷以產品的品質為第一位,完全按照品牌廠家的運輸條件執行,以最大的努力滿足客戶,贏得客戶信賴。如您有任何關于產品保存和運輸條件相關的疑問,請撥打我司服務熱線:400-6800-868 或 027-59626688,我們將竭誠為您服務。 


    此致,

    敬禮!

    武漢艾美捷科技有限公司         時間:2022 年 8 月 18 日星期四

  • Jackson凍干粉抗體溶解保存方法


    儲存:凍干粉原裝儲存在 2-8℃(不開封原裝保存 3-5 年)。

    溶解:加入一定體積 dH2O(參考特定說明書),溶解完全。工作液現用現配。

    保存:

    (短期保存)未稀釋的液體,在 2-8℃下穩定約 6 周;

    (長期保存)

    方法一、水化后分裝,置于-70°C 或以下冷凍保存,避免重復凍融。

    方法二、添加等體積的甘油(ACS 級或更高),終濃度變為原來的 50%,以液體形式儲存于-20℃。


    注意:加入甘油后使蛋白質濃度和稀釋的范圍都減半(比如:重溶后抗體的濃度是 0.8mg/ml,

    體積 2ml,抗體稀釋比例 1:5,000 - 1:100,000 for WB, 加入等體積(2ml)的甘油后, 抗體濃

    度變成 0.4mg/ml,體積 4ml,抗體稀釋比例變成 1:2500-1:50000 for WB)。


    水化后保質期:自補水之日起一年。如果測試結果符合預期用途,則可以延長有效期


  • ProSpec 細胞因子和重組蛋白溶解

    我們知道,ProSpec 相當一部分細胞因子和蛋白為凍干粉,這使得運輸非常便捷,只要常溫即可。而且,細胞因子和蛋白 凍干粉非常穩定,在-20-80條件下可保存數年。凍干粉在使用前需進行溶解,然后以液體形式加到培養體系。溶解步驟非 常關鍵,因溶解不好會導致細胞因子或蛋白的失活,這也是很多用戶在實際使用中經常遇到的問題。

    那么,應該如何進行正確的溶解呢? 

    下面我們以 Recombinant Human IL-4 (重組人 IL-4,產品編號:CYT-211)的說明書為例,對細胞因子或蛋白的溶解方法 進行詳細的闡述。 

    拿到重組人 IL-4 的說明書后,您會發現有一段關于 Reconstitution(重懸)的敘述,這段內容含有溶解相關的所有信息。


    1. Centrifuge the vial prior to opening  

    1 步:開蓋前離心試劑管 

    ProSpec 的細胞因子或蛋白凍干粉裝盛在塑料管中,為無菌包裝。凍干粉在運輸過程中可能會因顛簸而漂散并粘貼于管壁 或管蓋上,所以在打開塑料瓶蓋前,需將凍干粉通過離心收集到管底,以便用很小體積的液體即可將凍干粉完全溶解。 

    有很多用戶會問一個問題,即應該用多少轉速、多長時間離心試劑管,才能達到良好的收集效果? 

    答:有些小型高速離心機(多為進口品牌)的面板上有一個 Spin 鍵,按了此鍵后,離心機會自動快速上升到其最大速度 (10000rpm 12000rpm),上升到最高點后速度即刻下降,直至停止旋轉,整個過程大約 30s。這個 Spin 鍵足以很好的將細 胞因子或蛋白收集到管底。但有些實驗室沒有這樣的高速離心機,只有最高轉速為 4000-4500rpm 的離心機。這種情況下,需 3000-3500rpm 離心 5min,也能達到類似的效果。


    2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do notvortex. 

    2 步:用無菌水重懸至 0.1-1.0 mg/ml,不可振蕩。 

    這個步驟即為溶解步驟,非常重要。 

    1) 一定要用推薦的溶液重懸(或溶解)凍干粉 

    用于溶解細胞因子或蛋白的溶液千差萬別。此例中的重組人 IL-4 需用水溶解,而重組人 IL-2 (產品編號:CYT-209)則需用 20mM Acetic Acid (醋酸)溶解,重組人 TGF-beta1(產品編號:CYT-716)需用 10mMAcetic Acid (醋酸)溶解 (注:即使同一 重組細胞因子或蛋白,不同批次的溶解方法也可能有所不同,因此上面的敘述僅供參考。具體應該如何溶解應以相應批次的官方 說明書為準)。后續的文章中將對各種溶解液的配制方法進行詳細的闡述,望繼續關注。 

    經常有用戶會問,為什么會有這么多種溶解方法? 

    答:我們知道,蛋白的溶解性與很多因素有關,其中比較重要的是 pH 值和離子強度。ProSpec 的細胞因子或重組蛋白在 出廠前均經嚴格測試,說明上所標明的溶解液是能夠將該細胞因子或重組蛋白完全溶解的液體。如果您所用的溶解液的 pH 值和 離子強度與說明書中所標明的不符,很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能完全溶解或者根本無法溶解,這樣所配得的細胞因 子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。 

    有不少用戶沒注意說明書上的描述,而是根據習慣,直接用 PBS 或培養液(1640 或 DMEM 等)等溶解細胞因子或蛋白的 凍干粉。這樣做可以嗎?

    答:有時可以,要看具體情況。ProSpec 的大多數細胞因子或蛋白凍干粉的溶解液不是 PBS,此時千萬不能用 PBS 或培 養液直接來溶解,具體原因在上面已經敘述過。而有部分細胞因子,如重組人 KGF 和重組人 FGF-23 等,說明書上的溶解液即為 1x PBS,此時用 PBS 溶解完全沒問題,那么用培養液溶解也是可以的,不過最好還是用先用 PBS 溶解,然后再用培養液稀釋。 

    2) 一定要溶解到指定的濃度。 蛋白在一定的濃度范圍內可以保持良好的穩定性,這個范圍就是說明書上所標明的濃度范圍,該例為 0.1-1.0mg/ml。 這個濃度范圍對于不同的細胞因子或重組蛋白是不同的。 

    高于或低于該濃度范圍會有什么問題呢? 

    答:首先,細胞因子或蛋白會不穩定,即很容易出現活性下降的現象。其次,高于這個濃度范圍,可能會超過該蛋白的 最大溶解濃度,即蛋白無法完全溶解。再者,高于或低于該濃度范圍,蛋白可能會出現聚集(aggregation),最終結果還是部分 蛋白未溶解,導致蛋白活性的減弱。 

    3) 一定不能振蕩(vortex)。 

    這里所說的振蕩是指用渦旋儀進行快速振蕩。 

    有用戶會問,若想保證溶解液與凍干粉充分混勻,以實現細胞因子或重組蛋白的完全溶解,該怎么辦呢?

    答:多數細胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的,一般我們用移液槍的槍頭輕吹幾下,即可使細胞因子或重組 蛋白完全溶解。 

    對于不易溶解的細胞因子或蛋白,ProSpec 會在說明書中進行備注。這種情況下,您最好能將要溶解的細胞因子或重組 蛋白放在水平搖床(shaker)上低速搖一段時間,促使細胞因子或重組蛋白完全溶解。 


    3. This solution can be stored at 2-8for up to 1week. 

    3 步:該重懸液在 2-8最長可保存 1 周。 

    用說明書上推薦的溶液將細胞因子或重組蛋白重懸到推薦的濃度后,細胞因子或重組蛋白可放置在 2-8,即冰箱的冷藏室。 在這種條件下,細胞因子或重組蛋白的活性最長可保持 1 周。這對一個周期為 5-7 天的實驗,如 DC(樹突狀細胞)的誘導成熟是 足夠的。在此期間,只要每次從冰箱里吸取一定量的細胞因子或重組蛋白溶液加入到培養體系內即可。 

    其實,說明書上推薦的濃度對于一般的實驗來講是比較高的。所以用戶通常會將該溶液進一步稀釋后再放在 4保存,待 1 周內用完。如進行稀釋,必須遵照下面第 4 步的方法,即需用含載體蛋白的溶液進行稀釋,否則稀釋后的細胞因子或重組蛋白很 容易會粘附在管壁或瓶壁上,使得溶液中的細胞因子或重組蛋白的濃度下降,細胞因子或重組蛋白的總活性則大為減弱。


    4. For extended storage, it is recommended to further dilute in abuffer containing a carrier protein (example 0.1%  BSA) and store in workingaliquots at -20to -80

    4 步:如要長期保存,則需用含載體蛋白(0.1% BSA,或 10% FBS,或 5% HSA)的溶液進一步稀釋,然后分裝凍存于-20-80。 

    如果一個實驗周期長于一周,或配制的細胞因子或重組蛋白一次用不完,我們就需對細胞因子或重組蛋白進行長期保存。 方法是:將已重懸的細胞因子或蛋白用含載體蛋白,如 0.1%BSA(牛血清白蛋白),10% FBS(胎牛血清),5% HSA(人血清白蛋白) 的溶液將重懸液進一步稀釋,然后分裝凍存于-20-80,即常規冰箱的冷凍室或超低溫冰箱中。 

    經常有人會在細胞因子或重組蛋白凍干粉用推薦的溶液重懸后直接分裝凍存于-20至-80,這樣可以嗎? 

    答:不行。我們知道,塑料管壁對多數蛋白均有很好的吸附作用,也就是說溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。粘附后, 蛋白是很難與管壁分離的。做過 ELISA 實驗的人都知道,ELISA 的包被抗體(Capture antibody)就是通過這種粘附作用包被到酶 標板上的。 

    載體蛋白,如 1% BSA,10% FBS(胎牛血清)5% HSA 等的主要作用是預先封閉塑料管壁上的蛋白結合位點,使細胞因子 或重組蛋白不會粘附于管壁。如果在細胞因子或重組蛋白凍干粉用推薦的溶液重懸后不用含載體蛋白的溶液進一步稀釋,而直接 分裝凍存,則溶液中的大部分細胞因子或重組蛋白均會粘附到管壁上,導致溶液中實際溶解的細胞因子或重組蛋白的濃度大為降 低,最終表現為細胞因子或重組蛋白活性的下降。 

    因此,在分裝凍存前,一定要用含載體蛋白的溶液將重懸液進一步稀釋。稀釋后的細胞因子或重組蛋白可為任意濃度,因大 量的載體蛋白可以保證低濃度細胞因子或重組蛋白仍然維持較高的穩定性。 

    那么,含載體蛋白的溶液指的是什么溶液呢?水可以嗎? 

    答:水不可。該溶液通常是指 pH 近中性,有一定緩沖能力的緩沖液,如 PBS,培養液(RPMI1640, DMEM )等。 

    還有一個經常被問及的問題,即在做無血清培養或動物的體內實驗時,細胞因子中不能含有 BSA,FBS 或 HSA 等動物或 人的蛋白,要想長期保存細胞因子或重組蛋白該怎么辦呢? 

    答:一種方法是訂購 ProSpec 的小包裝細胞因子或重組蛋白,每次使用一只,用后即廢棄。


    5. 后續稀釋液的配方:即原產品的溶液的配方。 

    總之,為保證細胞因子或重組蛋白凍干份在重懸后仍能保持良好的生物活性,必須按照說明書中 Reconstitution 的方法 嚴格操作。 

    蛋白有價,實驗無價,愿大家珍惜每次實驗機會,嚴謹認真,每次均能得到預期的實驗結果!


  • 如何確定細胞因子的種屬交叉活性?

    1) 除少數例外,大多數人類細胞因子對小鼠細胞均有活性。

    2) 許多小鼠細胞因子也可作用于人類細胞,但比活性可能低 于對應的人類細胞因子。 

    3) IL-7 等為數不多的人類細胞因子作用于小鼠細胞時比對應的小鼠細胞因子活性更強。

    4) 干擾素, GM-CSF, IL-3 IL-4 等細胞因子種屬特異,對非同源細胞幾乎沒有活性。

    5) 相反,成纖維細胞生長因子(FGFs)和神經營養素 (neurotrophins)高度保守,在不同動物種屬細胞上均具有很好的活性。

  • ED50 和 units/mg 之間有何關聯?

    ED50 為半數有效濃度,其定義是可誘導 50%最大反應的細胞因子濃度,這種活性表示法僅適用于劑量反應曲線呈 S 的細胞因子。其實,可以將 ED50 的值接理解為 1unit。如某種細胞因子或蛋白的 ED50 1ng/ml,那么 1ng/ml 即可看作是 1unit。 那么我們也不難理解,1mg(1x106ng) 該細胞因子或蛋白中應含 1x106/1= 106units. ED50(ng/ml)轉化為 units/mg 的公式如下:

    image.png

  • 為什么有時在管中看不到細胞因子或蛋白的凍干粉?

    與市場上的許多蛋白產品不同,ProSpec 的產品中均不含載體蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA),人血清白蛋白 (HSA)和蔗糖等,并且是以最低含鹽量的溶液進行凍干的,因此凍干后常常不能形成白色網架結構,而是微量的蛋白在凍干過程 中沉積在管內,形成很薄或肉眼不可見的透明蛋白層。打開管蓋前,我們建議您在小離心機中快速離心 20-30 秒,使附著在管蓋 或管壁上的蛋白聚集于管底。我們的質控步驟保證每管中所含的蛋白量準確無誤,雖然有時您無法看到蛋白粉末,但管中的蛋白 含量仍是非常精確的。

  • ProSpec 細胞因子和蛋白產品的穩定性如何?

    除非在產品說明書中特別注明,ProSpec 相當一部分產品為凍干粉,它們在室溫條件下非常穩定(至少 1 個月)。盡管如 此,我們還是建議您在收到我們的產品后保存于-20℃,以確保蛋白 100%的活性。對于大多數蛋白,重懸后在 4℃僅能短期保存 (1 )。如想長期保存,請先配制成稀釋液(其中必須含有載體蛋白,如 0.1% BSA,5%HSA,或 10% FBS),然后分裝凍存于 -20℃-80℃。一定要避免反復凍融,因每次凍融均會引起蛋白的部分失活。

  • Abnova抗體應用類型:

    WB           Western Blot

    WB-Ce   Western Blot (Cell lysate)         細胞裂解液(天然細胞,內源)

    WB-Re   Western Blot (Recombinant protein)   重組蛋白(外源轉染質粒到細菌,表達蛋白)

    WB-Ti   Western Blot (Tissue lysate)      組織裂解液(天然組織,內源)

    WB-Tr   Western Blot (Transfected lysate)      轉染裂解液(外源轉染質粒到細胞,表達蛋白)

    image.png

    實驗類型選擇優先(涵蓋范圍):


    WB > WB-Ti > WB-Ce  


    WB-Re 和 WB-Tr,不推薦。如果客戶購買,建議跟客戶講一下,非官網承諾應用類型,廠家不受理投訴。


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